Plasmide CRISPR d'Activation (m) Sall4: sc-430262-ACT

Le gène murin **Sall4** code un facteur de transcription à doigts de zinc qui maintient les programmes de pluripotence et d’auto-renouvellement tout en coordonnant l’engagement des lignages au cours de l’embryogenèse précoce et du développement des cellules germinales. **Sall4** s’intègre aux réseaux transcriptionnels clés des cellules souches, notamment via des interactions régulatrices croisées avec **OCT4/POU5F1**, **SOX2** et **NANOG**, et influence l’état de la chromatine ainsi que des modules de répression/activation transcriptionnelle. Une activité **SALL4** dérégulée est associée à une différenciation anormale, à des phénotypes développementaux et à des programmes transcriptionnels oncogéniques dans de multiples systèmes modèles, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier la « stemness », la prolifération et la spécification du destin cellulaire. Chez la souris, **Sall4** est fréquemment utilisé pour explorer le contrôle épigénétique de l’expression génique et la logique moléculaire des circuits de régulation génique du développement.

Sall4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Sall4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sall4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Sall4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Sall4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sall4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Sall4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sall4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sall4 dans les cellules tumorales présentant une expression de Sall4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.