Plasmide CRISPR/Cas9 KO SAHH (h): sc-402617

Présentation

AHCY code l’hydrolase de la S-adénosylhomocystéine (SAHH), une enzyme clé du cycle de la méthionine qui hydrolyse la S-adénosylhomocystéine en adénosine et homocystéine, maintenant ainsi la capacité de méthylation cellulaire en levant l’inhibition par rétroaction des méthyltransférases dépendantes de la S-adénosylméthionine. Par ce rôle, la SAHH influence la régulation épigénétique, la méthylation de l’ARN et des protéines, ainsi que la biosynthèse des phospholipides, reliant le métabolisme à un carbone à un contrôle plus large des programmes d’expression génique. Une perturbation de l’activité d’AHCY peut modifier le potentiel de méthylation et l’homéostasie métabolique, affectant des voies liées à la prolifération, à la différenciation et aux réponses au stress. Une fonction altérée de la SAHH a été étudiée dans le contexte de troubles associés à la méthylation et de phénotypes cellulaires pertinents pour la biologie du cancer ainsi que pour des modèles de recherche en immunologie et en neurosciences.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SAHH (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène AHCY dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du AHCY, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert AHCY à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SAHH.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en AHCY pour l'étude de la signalisation de SAHH, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de AHCY essentiels à la fonction de SAHH
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de AHCY pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SAHH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SAHH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus AHCY. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SAHH plasmide HDR (h) et le SAHH (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie AHCY pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles AHCY définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.