Plasmide CRISPR d'Activation (h) SAA: sc-401081-ACT

Le gène humain **SAA2** code la protéine amyloïde sérique A (SAA), une apolipoprotéine majeure de la phase aiguë, produite principalement par les hépatocytes en réponse à des signaux inflammatoires tels que les voies IL‑1, IL‑6 et TNF. La SAA s’associe aux HDL et module le transport des lipides, la chimiotaxie et l’activation de l’immunité innée, reliant l’inflammation systémique aux processus métaboliques et vasculaires. Une expression élevée ou prolongée de la SAA est largement utilisée comme marqueur d’états inflammatoires et a été impliquée dans des réseaux de cytokines dérégulés ainsi que dans le remodelage tissulaire. En tant que précurseur contribuant à des voies amyloïdogènes, la biologie de la SAA est pertinente pour l’étude de l’inflammation chronique, des interactions avec la matrice extracellulaire et des mécanismes de l’amylose inflammatoire.

SAA Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SAA2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SAA Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SAA2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SAA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SAA. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SAA2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SAA au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SAA dans les cellules tumorales présentant une expression de SAA2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.