SA-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401222

Übersicht

STAG2 kodiert die menschliche Cohesin-Untereinheit SA-2, eine zentrale Komponente des Cohesin-Komplexes, der die Kohäsion der Schwesterchromatiden und die übergeordnete Organisation des Genoms vermittelt. SA-2 unterstützt die zuverlässige Chromosomentrennung während Mitose und Meiose, trägt zur Reparatur von DNA-Doppelstrangbrüchen bei und hilft bei der Regulation weitreichender Enhancer-Promotor-Interaktionen, die Transkriptionsprogramme prägen. Über diese Funktionen ist STAG2 mit der Zellzykluskontrolle, Replikationsstressantworten und Signalwegen der Chromatinarchitektur verknüpft. Eine Störung von STAG2 wird in der Krebsgenomik häufig beobachtet und ist mit chromosomaler Instabilität sowie veränderter Genregulation assoziiert, was den Lokus zu einem breit untersuchten Ziel in der Forschung zur Genomstabilität macht.

Das SA-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des STAG2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des STAG2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von STAG2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SA-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von STAG2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SA-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf STAG2-Exone abzielen, die für die SA-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere STAG2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SA-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SA-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des STAG2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SA-2 HDR-Plasmid (h) und SA-2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von STAG2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten STAG2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.