Particules Lentivirales d'Activation (h) S3-12: sc-409516-LAC

PLIN4 code la protéine humaine de la famille des périlipines S3-12, une protéine d’enveloppe associée aux gouttelettes lipidiques, enrichie dans les adipocytes et d’autres cellules de stockage des lipides. S3-12 participe à la biogenèse et au remodelage des gouttelettes lipidiques, en coordonnant le stockage des lipides neutres avec l’accès lipolytique et le trafic des protéines des gouttelettes lipidiques. En influençant la gestion des lipides et l’équilibre énergétique cellulaire, PLIN4 est fréquemment étudié dans le contexte de l’adipogenèse, de l’homéostasie métabolique et des réponses au stress lipidique, qui recoupent les voies de signalisation de l’insuline et d’utilisation des acides gras. Une régulation altérée de la dynamique des gouttelettes lipidiques et de la fonction de la famille des périlipines a été associée à des phénotypes métaboliques pertinents pour la résistance à l’insuline liée à l’obésité et la biologie des maladies cardiométaboliques associées.

Les particules d'activation lentivirales S3-12 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PLIN4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales S3-12 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PLIN4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de S3-12. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PLIN4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.