S-100 β chain CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422787

Übersicht

S100b kodiert die S-100-β-Kette, ein Ca2+-bindendes EF-Hand-Protein, das in Astrozyten und anderen Gliazellpopulationen angereichert ist und als intrazellulärer Signalmodulator sowie als extrazellulärer parakriner Faktor wirkt. Über calciumabhängige Interaktionen mit zytoskelettalen und enzymatischen Zielproteinen beeinflusst S-100β das Neuritenwachstum, die Zellzyklusprogression und Stressantworten und kann rezeptorvermittelte Signalwege aktivieren, etwa RAGE-assoziierte Pfade, die auf MAPK- und NF-κB-Programme konvergieren. Im zentralen Nervensystem wird S100b häufig als Glia-Marker verwendet und mit Neuroinflammation, der Regulation der Blut-Hirn-Schranke sowie Reaktionen auf oxidativen oder metabolischen Stress in Verbindung gebracht. Eine veränderte S100b-Expression wurde in zahlreichen Modellen neurologischer und neurodegenerativer Erkrankungen sowie in Verletzungsparadigmen beschrieben, was seinen Nutzen zur Analyse der Glia-Neuron-Kommunikation und inflammatorischer Signalnetzwerke unterstreicht.

Das S-100 β chain CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des S100b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des S100b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von S100b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die S-100 β chain-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von S100b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der S-100 β chain-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf S100b-Exone abzielen, die für die S-100 β chain-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere S100b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom S-100 β chain CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom S-100 β chain CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des S100b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das S-100 β chain HDR-Plasmid (m) und S-100 β chain HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von S100b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten S100b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.