S-100 β chain Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422787

Panoramica

S100b codifica la catena β di S-100, una proteina EF-hand legante Ca2+, arricchita negli astrociti e in altre popolazioni gliali, che funziona come modulatore di segnalazione intracellulare e come fattore paracrino extracellulare. Attraverso interazioni calcio-dipendenti con bersagli citoscheletrici ed enzimatici, S-100 β influenza l’estensione dei neuriti, la progressione del ciclo cellulare e le risposte allo stress, e può attivare segnali mediati da recettori, come le vie associate a RAGE, che convergono su programmi MAPK e NF-κB. Nel sistema nervoso centrale, S100b è ampiamente utilizzato come marcatore gliale ed è associato alla neuroinfiammazione, alla regolazione della barriera emato-encefalica e alle risposte a stress ossidativo o metabolico. Un’alterata espressione di S100b è stata riportata in diversi modelli di malattie neurologiche e neurodegenerative e in paradigmi di danno, supportandone l’utilità per analizzare la comunicazione glia–neurone e le reti di segnalazione infiammatoria.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO S-100 β chain (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene S100b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del S100b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto S100b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina S-100 β chain.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di S100b per lo studio della segnalazione di S-100 β chain, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni S100b critici per la funzione di S-100 β chain
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di S100b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal S-100 β chain CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal S-100 β chain CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus S100b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal S-100 β chain Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR S-100 β chain (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia S100b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio S100b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.