RyR-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402986

Übersicht

RYR2 kodiert den Ryanodinrezeptor 2 (RyR-2), einen tetrameren intrazellulären Ca²⁺-Freisetzungskanal, der im sarkoplasmatischen/endoplasmatischen Retikulum lokalisiert ist und die Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung vermittelt, indem er eine calciuminduzierte Calciumfreisetzung erzeugt. Die Aktivität von RyR-2 koordiniert Ca²⁺-Transienten, die die Kontraktion von Kardiomyozyten, den mitochondrialen Stoffwechsel und Ca²⁺-abhängige Signalwege regulieren, darunter CaMKII- und Calcineurin/NFAT-gekoppelte transkriptionelle Antworten. Die Kanalfunktion wird durch die Assemblierung makromolekularer Komplexe, posttranslationale Modifikationen und die luminale Ca²⁺-Sensorik geprägt und integriert adrenerge Signale mit der intrazellulären Ca²⁺-Homöostase. Genetische und funktionelle Störungen von RYR2 sind mit erblichen Arrhythmiesyndromen und kardiomyopathieassoziierten Phänotypen verbunden, wodurch das Gen einen zentralen Knotenpunkt für die Erforschung der kardialen Calciumhandhabung und stressresponsiver Signalübertragung darstellt.

Das RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RYR2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RYR2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RYR2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RYR2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RYR2-Exone abzielen, die für die RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RYR2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RYR2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout HDR-Plasmid (h) und RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RYR2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RYR2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.