Partículas Lentivirales de Activación (h) RyR-1: sc-401470-LAC

RYR1 codifica el receptor de rianodina 1 (RyR-1), un gran canal de liberación de Ca²⁺ incrustado en el retículo sarcoplásmico/endoplásmico que acopla la despolarización de la membrana con el flujo intracelular de Ca²⁺. Al controlar la liberación rápida de calcio inducida por calcio y el acoplamiento excitación–contracción, RyR-1 coordina señales posteriores dependientes de Ca²⁺ que influyen en el metabolismo, la función mitocondrial y programas de transcripción dependientes de la actividad. La función o expresión desregulada de RYR1 altera la homeostasis del calcio y se asocia con la fisiopatología del músculo esquelético, lo que lo convierte en un nodo central para estudiar redes de señalización de Ca²⁺ en miocitos humanos y modelos de músculo bioingenierizados. La modulación experimental de RYR1 se utiliza comúnmente para investigar el control de apertura/cierre del canal, la dinámica de los depósitos de Ca²⁺ y la comunicación cruzada de vías con respuestas al estrés, como la proteostasis del RE/RS.

Las partículas de activación lentiviral RyR-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de RYR1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral RyR-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción RYR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de RyR-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo RYR1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.