Plasmide Double Nickase (m) RUNX2: sc-419482-NIC

Runx2 code le facteur de transcription RUNX2, un régulateur maître de l’engagement de la lignée ostéoblastique et de la morphogenèse squelettique chez la souris. RUNX2 coordonne l’expression des gènes de la matrice osseuse et intègre des signaux issus des voies BMP/TGF-β, de l’activité Wnt/β-caténine et des voies MAPK afin de contrôler la différenciation ostéogénique, le dépôt de la matrice extracellulaire et la minéralisation. Au-delà du développement, une activité altérée de RUNX2 est associée à un remodelage osseux dérégulé et a été impliquée dans la calcification pathologique ainsi que dans des programmes tumoraux comprenant des transitions de type EMT et des métastases ostéotropes. Ces caractéristiques font de Runx2 une cible largement utilisée pour étudier la spécification de lignée, la mécanotransduction dans l’os et le remodelage des réseaux transcriptionnels dans des contextes pertinents pour la maladie.

RUNX2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Runx2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Runx2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Runx2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Runx2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.