RSAD2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402884-ACT

RSAD2 (Viperin) ist ein durch Interferon induzierter antiviraler Effektor, der im endoplasmatischen Retikulum und an Lipidtröpfchen lokalisiert und nachgeschaltet an die Signalübertragung von Mustererkennungsrezeptoren (pattern-recognition receptors) rasch hochreguliert wird. Es ist an angeborenen Immunwegen beteiligt, die durch Typ‑I‑Interferone und NF‑κB koordiniert werden, und prägt zelluläre Antworten auf Virusinfektionen, indem es membranassoziierte Prozesse und den Immunmetabolismus moduliert. RSAD2 wird mit der Regulation inflammatorischer Signalwege und der Zytokinproduktion in Verbindung gebracht, und seine Expression dient als molekularer Readout für die Aktivierung des Interferonwegs. Eine fehlregulierte RSAD2‑Aktivität und Interferon‑Signaturen werden häufig im Kontext chronischer Virusinfektionen und interferonassoziierter Immunpathologien untersucht.

RSAD2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RSAD2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

RSAD2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RSAD2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RSAD2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen RSAD2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RSAD2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von RSAD2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des RSAD2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RSAD2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.