Plasmide CRISPR d'Activation (m) RRP8: sc-430400-ACT

Le gène murin **Rrp8** code **RRP8**, un facteur nucléolaire conservé impliqué dans la biogenèse des ribosomes via des rôles dans la maturation et le traitement du pré-ARNr, ainsi que dans la maturation de la petite sous-unité ribosomique. En régulant le métabolisme des ARN nucléolaires et en soutenant la capacité de traduction, RRP8 influence des processus fondamentaux tels que la progression du cycle cellulaire, le contrôle de la croissance et les réponses au stress cellulaire. La perturbation des voies d’assemblage des ribosomes peut remodeler les programmes d’expression génique et la protéostasie, rendant l’activité de **Rrp8** pertinente pour l’étude de la fonction du nucléole, des phénotypes de prolifération et des ribosomopathies associées à des maladies, ainsi que des altérations de la biogenèse ribosomique liées au cancer.

RRP8 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Rrp8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RRP8 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Rrp8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Rrp8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RRP8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Rrp8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RRP8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RRP8 dans les cellules tumorales présentant une expression de Rrp8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.