Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rrn3 (h): sc-403709

Présentation

RRN3 code pour Rrn3, un facteur de transcription associé à la Pol I qui aide à recruter l’ARN polymérase I sur l’ADN ribosomique et soutient la synthèse du pré‑ARNr, reliant ainsi les signaux de croissance à la biogenèse des ribosomes. L’activité de Rrn3 est régulée par des voies de signalisation sensibles aux nutriments et au stress, notamment via un contrôle de l’initiation par la Pol I dépendant de mTOR, et elle contribue à la fonction nucléolaire et à la protéostasie en gouvernant la production d’ARNr. Comme la transcription de l’ADNr est étroitement couplée à la prolifération et à l’adaptation cellulaire au stress, les dynamiques RRN3–Pol I altérées sont étudiées dans des contextes de croissance dérégulée, d’instabilité génomique et de phénotypes de stress nucléolaire. RRN3 est donc pertinent pour étudier comment la biogenèse des ribosomes s’interface avec le contrôle du cycle cellulaire et la reprogrammation métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rrn3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RRN3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RRN3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RRN3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rrn3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RRN3 pour l'étude de la signalisation de Rrn3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RRN3 essentiels à la fonction de Rrn3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RRN3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rrn3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Rrn3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RRN3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rrn3 plasmide HDR (h) et le Rrn3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RRN3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RRN3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.