Plasmide CRISPR d'Activation (h) Rrn3: sc-403709-ACT

Le gène humain **RRN3** code le facteur d’initiation de la transcription par l’ARN polymérase I **Rrn3** (également appelé **TIF-IA**), un régulateur central de la synthèse de l’ARN ribosomal et de la fonction nucléolaire. Rrn3 fait le lien entre Pol I et les facteurs liés au promoteur afin de permettre la transcription du pré‑ARNr et soutient la biogenèse des ribosomes, couplant ainsi les besoins de croissance cellulaire à la capacité de synthèse protéique. Son activité est étroitement contrôlée par des voies de signalisation dépendantes des nutriments et de la croissance, notamment **mTOR** et **MAPK/ERK**, via une régulation post‑traductionnelle qui module la compétence d’initiation de Pol I. Une transcription Pol I dérégulée et le stress nucléolaire associés à une altération de la fonction de RRN3 sont pertinents pour la biologie de la prolifération et les réponses au stress cellulaire, fréquemment étudiées dans des contextes de cancer et de signalisation métabolique.

Rrn3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RRN3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Rrn3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RRN3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RRN3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Rrn3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RRN3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Rrn3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Rrn3 dans les cellules tumorales présentant une expression de RRN3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.