RRBP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410995

Übersicht

RRBP1 (Ribosomenbindungsprotein 1) kodiert ein mit der Membran des endoplasmatischen Retikulums (ER) assoziiertes Protein, das die kotranslationale Zielsteuerung neu entstehender Polypeptide zum ER unterstützt und zur Organisation des ER sowie zur Kapazität des sekretorischen Weges beiträgt. Durch die Verknüpfung von Ribosomen mit dem rauen ER beeinflusst RRBP1 Proteinsynthese, -faltung und -transport – Prozesse, die eng mit der ER-Homöostase und der Antwort auf fehlgefaltete Proteine (unfolded protein response, UPR) verbunden sind. Eine veränderte RRBP1-Expression wurde in Zusammenhängen von zellulärem Stress und proliferativem Remodeling beschrieben, was RRBP1 für die Untersuchung von Proteostase, ER-assoziierter Anpassung und Signalnetzwerken im Zusammenhang mit sekretorischem Bedarf relevant macht. RRBP1 ist daher von Interesse in Modellen, die ER-Stresssensitivität, Dynamiken des Membrantransports und krankheitsassoziierte Störungen der Proteinverarbeitung untersuchen.

Das RRBP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RRBP1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RRBP1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RRBP1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RRBP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RRBP1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RRBP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RRBP1-Exone abzielen, die für die RRBP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RRBP1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RRBP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RRBP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RRBP1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RRBP1 HDR-Plasmid (h) und RRBP1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RRBP1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RRBP1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.