RPA135 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402818

Panoramica

POLR1B codifica RPA135, la seconda subunità catalitica per dimensioni dell’RNA polimerasi I, che guida la sintesi del pre-rRNA 47S nel nucleolo. RPA135 è centrale per la biogenesi dei ribosomi e collega la segnalazione dei fattori di crescita e lo stato nutrizionale alla trascrizione del rDNA, risultando quindi associata all’organizzazione nucleolare, alla progressione del ciclo cellulare e alla proteostasi. La perturbazione della trascrizione da parte della Pol I attiva vie di stress nucleolare che convergono su checkpoint dipendenti da p53 e può rimodellare i programmi globali di traduzione. La produzione deregolata di rRNA e la biogenesi ribosomiale alterata sono caratteristiche ricorrenti di stati proliferativi e di adattamento allo stress, rendendo POLR1B un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale del rDNA e la funzione del nucleolo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RPA135 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene POLR1B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del POLR1B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto POLR1B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RPA135.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di POLR1B per lo studio della segnalazione di RPA135, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni POLR1B critici per la funzione di RPA135
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di POLR1B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RPA135 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RPA135 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus POLR1B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RPA135 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RPA135 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia POLR1B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio POLR1B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.