Plasmide CRISPR/Cas9 KO RoXaN (m): sc-422830

Présentation

Zc3h7b code RoXaN, une protéine à doigt de zinc impliquée dans le métabolisme de l’ARN et la régulation post‑transcriptionnelle, à laquelle on attribue des rôles dans la coordination de complexes ribonucléoprotéiques influençant la stabilité et la traduction des ARNm. Par ces activités, RoXaN peut moduler des programmes cellulaires liés à la prolifération, aux réponses au stress et à la différenciation en façonnant, au niveau des transcrits, l’expression de composants de voies de signalisation. Une régulation altérée des facteurs de liaison à l’ARN et des protéines à doigt de zinc est fréquemment associée à une dérégulation du contrôle de la croissance ainsi qu’à des phénotypes immunitaires ou neurodéveloppementaux, ce qui fait de Zc3h7b un locus utile pour des études mécanistiques du contrôle de l’expression génique. Dans les systèmes murins, la perturbation de Zc3h7b permet d’examiner comment les réseaux de régulation de l’ARN s’entrecroisent avec la signalisation et les transitions d’état cellulaire dans des contextes pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RoXaN (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Zc3h7b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Zc3h7b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Zc3h7b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RoXaN.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Zc3h7b pour l'étude de la signalisation de RoXaN, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Zc3h7b essentiels à la fonction de RoXaN
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Zc3h7b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RoXaN plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RoXaN plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Zc3h7b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RoXaN plasmide HDR (m) et le RoXaN (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Zc3h7b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Zc3h7b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.