Plasmide CRISPR d'Activation (h) RoXaN: sc-411701-ACT

ZC3H7B code pour RoXaN, une protéine cytoplasmique se liant à l’ARN, impliquée dans la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique via des interactions avec la protéine de liaison à la poly(A) et des composants des complexes ribonucléoprotéiques messagers. RoXaN a été associée au contrôle de la stabilité des ARNm et de leur traduction, favorisant l’expression coordonnée de gènes impliqués dans les réponses au stress cellulaire et les programmes liés à la croissance. Des interactions rapportées avec des facteurs viraux mettent en évidence un rôle à l’interface hôte–pathogène ainsi que dans la régulation du métabolisme de l’ARN au cours de l’infection. La dérégulation des protéines liant l’ARN et des voies de maturation/traitement des ARNm est largement pertinente en cancérologie et dans des phénotypes neurologiques et immunologiques, ce qui fait de ZC3H7B une cible utile pour des études mécanistiques du contrôle de l’expression génique.

RoXaN Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZC3H7B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RoXaN Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZC3H7B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZC3H7B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RoXaN. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZC3H7B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RoXaN au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RoXaN dans les cellules tumorales présentant une expression de ZC3H7B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.