Plasmide Double Nickase (h) ROS-GC1: sc-404483-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ROS-GC1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ROS-GC1 Double Nickase (h) et le plasmide ROS-GC1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GUCY2D. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ROS-GC1 Antibody (B-7): sc-376217
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ROS-GC1 | sc-404483-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ROS-GC1 | sc-404483-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **GUCY2D** code la **guanylate cyclase 1 du segment externe des bâtonnets et des cônes** (ROS-GC1), une enzyme associée à la membrane qui convertit le GTP en cGMP afin de maintenir la signalisation des nucléotides cycliques dans les photorécepteurs. ROS-GC1 agit en aval de la phototransduction en intégrant une rétroaction dépendante du Ca²⁺ via les protéines activatrices des guanylates cyclases, pour rétablir les niveaux de cGMP et réguler l’activité des canaux activés par le cGMP. Cette voie contribue à l’homéostasie du segment externe et à la transmission synaptique en couplant les variations de Ca²⁺ intracellulaire induites par la lumière au renouvellement des nucléotides cycliques. Les altérations génétiques de **GUCY2D** sont fortement associées à des phénotypes de dégénérescence rétinienne héréditaire, ce qui fait de ce gène un nœud central pour l’étude du métabolisme du cGMP, de la fidélité de la signalisation sensorielle et des mécanismes de survie des photorécepteurs.
ROS-GC1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GUCY2D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GUCY2D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GUCY2D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GUCY2D.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.