Plásmido Doble Nickase (h) ROS-GC1: sc-404483-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ROS-GC1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ROS-GC1 (h) y el plásmido de doble nickasa ROS-GC1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GUCY2D. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ROS-GC1 Anticuerpo (B-7): sc-376217
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ROS-GC1 | sc-404483-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ROS-GC1 | sc-404483-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El GUCY2D humano codifica la guanilato ciclasa 1 del segmento externo de los fotorreceptores (ROS-GC1), una enzima asociada a la membrana que convierte GTP en cGMP para mantener la señalización por nucleótidos cíclicos en las células fotorreceptoras. ROS-GC1 actúa aguas abajo de la fototransducción, integrando la retroalimentación dependiente de Ca²⁺ mediante proteínas activadoras de la guanilato ciclasa para restablecer los niveles de cGMP y regular la actividad de los canales activados por cGMP. Esta vía favorece la homeostasis del segmento externo y la señalización sináptica al acoplar los cambios de Ca²⁺ intracelular inducidos por la luz con el recambio de nucleótidos cíclicos. Las alteraciones genéticas en GUCY2D están estrechamente vinculadas a fenotipos de degeneración retiniana hereditaria, lo que convierte a este gen en un nodo clave para estudiar el metabolismo del cGMP, la fidelidad de la señalización sensorial y los mecanismos de supervivencia de los fotorreceptores.
ROS-GC1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GUCY2D en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GUCY2D. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GUCY2D. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GUCY2D alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.