Particules Lentivirales d'Activation (m) RORγ: sc-422700-LAC

Rorc code le récepteur nucléaire RORγ, un facteur de transcription régulé par des ligands qui se fixe sur des éléments de réponse ROR afin de coordonner des programmes d’expression génique spécifiques des tissus et du contexte. Dans le système immunitaire, l’activité de l’isoforme RORγt est centrale pour la différenciation et le maintien des cellules Th17 et des cellules lymphoïdes innées de groupe 3, reliant des réseaux de cytokines tels que la signalisation IL‑17/IL‑23 à des circuits transcriptionnels inflammatoires. RORγ contribue également au développement des thymocytes et, plus largement, à des voies de régulation associées au métabolisme et aux rythmes circadiens via la signalisation des récepteurs nucléaires. Une activité Rorc/RORγ dérégulée a été impliquée dans des modèles d’auto-immunité et d’inflammation chronique, ce qui en fait une cible largement utilisée pour des études mécanistiques des décisions de destinée des cellules T et de l’immunité muqueuse.

Les particules d'activation lentivirales RORγ (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Rorc dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales RORγ (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Rorc, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de RORγ. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Rorc ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.