Plasmide CRISPR d'Activation (m) RORγ: sc-422700-ACT

Rorc code le récepteur nucléaire RORγ, un facteur de transcription régulé par des ligands qui se fixe sur des éléments de réponse ROR afin de coordonner, chez la souris, des programmes impliqués dans la différenciation immunitaire et l’homéostasie tissulaire. RORγ est un régulateur central de la spécification de la lignée Th17 et de l’activité du réseau de cytokines IL‑17, intégrant les signaux issus des voies JAK/STAT activées par les cytokines avec le remodelage de la chromatine pour façonner l’expression des gènes inflammatoires. Au-delà de ses fonctions immunitaires, RORγ contribue à des rythmes transcriptionnels liés au métabolisme et au cycle circadien via des interactions avec des régulateurs clés de l’horloge biologique et du métabolisme lipidique. Une activité Rorc/RORγ dérégulée est fréquemment étudiée dans des modèles d’inflammation chronique et d’auto-immunité, ainsi que dans des contextes d’immunologie tumorale où des programmes associés aux Th17 influencent le microenvironnement immunitaire.

RORγ Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Rorc sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RORγ Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Rorc dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Rorc, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RORγ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Rorc natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RORγ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RORγ dans les cellules tumorales présentant une expression de Rorc silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.