Plasmide CRISPR/Cas9 KO ROG (h): sc-406421

Présentation

ZBTB32 code le facteur de transcription ROG, une protéine à doigts de zinc contenant un domaine BTB/POZ, qui module des programmes d’expression génique contrôlant l’activation, la différenciation et la fonction effectrice des lymphocytes. ROG participe à la répression transcriptionnelle et à la régulation, associée à la chromatine, de gènes de cytokines et de gènes dépendants de l’activation, influençant des voies liées à l’homéostasie immunitaire et aux réponses induites par l’antigène. Dans les cellules immunitaires humaines, une activité altérée de ZBTB32 a été associée à une dérégulation des signaux inflammatoires et à des modifications dépendantes du contexte de la fonction des cellules T et B, ce qui étaye sa pertinence pour l’étude des mécanismes des maladies à médiation immunitaire. En tant que nœud de régulation, ZBTB32 est fréquemment étudié dans des modèles de tolérance immunitaire, d’épuisement immunitaire et de remodelage transcriptionnel en réponse aux stimuli.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ROG (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZBTB32 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZBTB32, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZBTB32 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ROG.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZBTB32 pour l'étude de la signalisation de ROG, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZBTB32 essentiels à la fonction de ROG
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZBTB32 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ROG plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ROG plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZBTB32. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ROG plasmide HDR (h) et le ROG (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZBTB32 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZBTB32 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.