ROG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406421

Übersicht

ZBTB32 kodiert den Transkriptionsfaktor ROG, ein BTB/POZ-Domänen-Zinkfingerprotein, das Genexpressionsprogramme moduliert, welche die Aktivierung, Differenzierung und Effektorfunktion von Lymphozyten steuern. ROG ist an transkriptioneller Repression sowie an chromatinasoziierter Regulation von Zytokin- und aktivierungsabhängigen Genen beteiligt und beeinflusst damit Signalwege, die mit der Immunhomöostase und antigengetriebenen Antworten verknüpft sind. In menschlichen Immunzellen wurde eine veränderte ZBTB32-Aktivität mit fehlregulierter inflammatorischer Signalübertragung und kontextabhängigen Veränderungen der T- und B-Zell-Funktion in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für Studien zu Mechanismen immunvermittelter Erkrankungen unterstreicht. Als regulatorischer Knotenpunkt wird ZBTB32 häufig in Modellen der Immuntoleranz, der Immunerschöpfung und des stimulusabhängigen transkriptionellen Remodelings untersucht.

Das ROG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ZBTB32-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ZBTB32-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ZBTB32 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ROG-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ZBTB32-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ROG-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ZBTB32-Exone abzielen, die für die ROG-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ZBTB32-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ROG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ROG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ZBTB32-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ROG HDR-Plasmid (h) und ROG HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ZBTB32-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ZBTB32-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.