Partículas Lentivirales de Activación (h) RNF8: sc-401909-LAC
- Especies Diana: human
- 200 µl de Partículas Lentivirales de Activación CRISPR/dCas listas para usar
- Partículas Lentivirales de Acitvación (h) RNF8 es un sistema de activación de la trascripción por mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen determinado a través de la tranducción lentiviral de las células
- Partículas Lentivirales de Acitvación (h) RNF8 incluyen los siguientes elementos activadores SAM: plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada, (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y un plásmido que codifica la secuencia de diana específica de 20 nt de ARN. También contienen genes de resistencia a blasticidina, higromicina y puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación génica
- Los gRNA codificados por el RNF8 Plásmido de activación lentiviral (h) y el RNF8 Plásmido de activación lentiviral (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas del promotor RNF8. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia de la activación génica puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RNF8 Anticuerpo (B-2): sc-271462
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Partículas Lentivirales de Activación (h) RNF8 | sc-401909-LAC | 200 µl | $455.00 |
El RNF8 humano codifica una ligasa E3 de ubiquitina con dedo RING que coordina la respuesta al daño del ADN al catalizar la señalización de ubiquitina en los sitios de roturas de doble cadena del ADN. Mediante la comunicación cruzada con las vías ATM/ATR, RNF8 favorece el reclutamiento y la retención de factores clave de reparación, incluidos 53BP1 y BRCA1, así como de ensamblajes posteriores dependientes de ubiquitina que regulan la activación de los puntos de control y la elección de la vía de reparación. RNF8 también está implicado en la remodelación de la cromatina y el mantenimiento de la estabilidad genómica, vinculando su actividad con resultados celulares como la detención del ciclo celular, la apoptosis y la senescencia bajo estrés genotóxico. La ubiquitinación dependiente de RNF8 desregulada se ha asociado con fenotipos de inestabilidad genómica y con una señalización del daño alterada observada en múltiples contextos relevantes para el cáncer y en otros trastornos de reparación del ADN.
Las partículas de activación lentiviral RNF8 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de RNF8 en una gama más amplia de tipos de células humanas.
Las partículas de activación lentiviral RNF8 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción RNF8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de RNF8. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo RNF8 y la arquitectura reguladora.
El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.