Plásmido Doble Nickase (h) RNF8: sc-401909-NIC

RNF8 codifica una ligasa E3 de ubiquitina que actúa como un factor temprano de señalización en la cromatina durante la respuesta al daño del ADN, catalizando la ubiquitinación en sitios de roturas de doble cadena para promover el reclutamiento de mediadores de reparación posteriores. Mediante la coordinación con eventos de fosforilación dependientes de ATM y cascadas de señalización por ubiquitina, RNF8 ayuda a organizar la elección de la vía de reparación y sostiene, de manera dependiente del contexto, tanto la recombinación homóloga como la unión de extremos no homólogos. La actividad de RNF8 contribuye al mantenimiento de la estabilidad genómica, la regulación de los puntos de control del ciclo celular y la remodelación de la cromatina en el ADN dañado. La alteración de la señalización por ubiquitina dependiente de RNF8 se estudia con frecuencia en modelos de inestabilidad genómica y de defectos de reparación del ADN asociados al cáncer.

RNF8 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RNF8 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RNF8. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RNF8. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RNF8 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.