Plasmide Double Nickase (h) RNF20: sc-412695-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RNF20 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RNF20 Double Nickase (h) et le plasmide RNF20 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RNF20. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: RNF20 Antibody (1594CT552.128.36): sc-517358
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RNF20 | sc-412695-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) RNF20 | sc-412695-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF20 code une ligase E3 ubiquitine‑protéine qui, avec RNF40, forme le complexe BRE1 responsable de la monoubiquitination de l’histone H2B (H2BK120ub). Cette modification de la chromatine favorise l’élongation transcriptionnelle et s’articule avec des programmes en aval de méthylation des histones, influençant l’expression génique à l’échelle du génome, la signalisation des dommages à l’ADN et le choix des voies de réparation. L’activité de RNF20 est liée au maintien de la stabilité génomique via la régulation des réponses aux cassures double brin et du remodelage de la chromatine associé à la réplication. La dérégulation de l’ubiquitination des histones dépendante de RNF20 a été associée à des réseaux transcriptionnels altérés et à l’instabilité génomique observés dans de multiples contextes pathologiques, ce qui motive son étude dans les mécanismes épigénétiques et de réparation de l’ADN.
RNF20 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RNF20 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RNF20. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RNF20. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RNF20.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.