Plasmide CRISPR/Cas9 KO RNF185 (h): sc-416413

Présentation

RNF185 code une ligase E3 de type RING de la membrane externe mitochondriale, qui contribue au contrôle qualité des protéines en catalysant le transfert d’ubiquitine vers des substrats sélectionnés. Par le biais du renouvellement et de la signalisation dépendants de l’ubiquitine, RNF185 a été associée à la régulation de l’homéostasie mitochondriale, à des processus liés à la mitophagie et au dialogue entre la fonction mitochondriale et la signalisation de l’immunité innée. Des interactions rapportées avec les voies de l’autophagie et de l’inflammation étayent sa pertinence pour l’étude des réponses au stress qui relient les dommages aux organites à des programmes transcriptionnels en aval. Une activité altérée de RNF185 a été étudiée dans des contextes où la dysfonction mitochondriale et une protéostase dérégulée sont impliquées, notamment dans la neuro-inflammation et le remodelage métabolique associé au cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RNF185 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RNF185 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RNF185, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RNF185 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RNF185.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RNF185 pour l'étude de la signalisation de RNF185, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RNF185 essentiels à la fonction de RNF185
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RNF185 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RNF185 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RNF185 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RNF185. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RNF185 plasmide HDR (h) et le RNF185 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RNF185 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RNF185 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.