Plasmide Double Nickase (h) RNF165: sc-416077-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RNF165 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RNF165 Double Nickase (h) et le plasmide RNF165 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RNF165. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RNF165 | sc-416077-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) RNF165 | sc-416077-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF165 code une ligase E3 de type RING impliquée dans le contrôle dépendant de l’ubiquitine de la stabilité des protéines et des sorties de signalisation dans les cellules humaines. En catalysant l’ubiquitination des substrats, RNF165 devrait influencer la protéostasie, les voies de réponse au stress, ainsi que l’amplitude et la durée des cascades de transduction du signal qui reposent sur un renouvellement protéique régulé. Le dérèglement de l’activité des ligases E3 et des composants de la voie de l’ubiquitine est largement associé à des altérations du contrôle du cycle cellulaire, de la signalisation de l’immunité innée et à des phénotypes oncogéniques, ce qui fait de RNF165 un nœud utile pour des études mécanistiques. L’étude de la fonction de RNF165 peut aider à préciser comment la régulation médiée par l’ubiquitine façonne l’homéostasie cellulaire et la biologie des maladies selon le contexte.
RNF165 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RNF165 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RNF165. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RNF165. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RNF165.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.