RNF149 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406588

Übersicht

RNF149 codiert ein RING-Finger-haltiges Protein, dem eine Funktion als E3-Ubiquitin-Ligase zugeschrieben wird, wodurch es die ubiquitinabhängige Kontrolle der Proteinstabilität und der Signaldynamik unterstützt. E3-Ligasen vom RING-Typ tragen zur Regulation der Proteostase, von Stressantworten sowie des Turnovers von Signalwegkomponenten bei, die den Zellzyklus und Überlebensentscheidungen von Zellen mitbestimmen. RNF149 ist daher relevant, um zu verstehen, wie Ubiquitinierung und proteasomaler Abbau die zelluläre Homöostase und Signaltransduktion koordinieren. Eine veränderte Regulation des Ubiquitin-Systems ist häufig mit Tumorbiologie und anderen Erkrankungen verbunden, die mit der Proteinkontrolle zusammenhängen, was RNF149 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien in krankheitsrelevanten Modellen macht.

Das RNF149 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RNF149-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RNF149-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RNF149 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RNF149-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RNF149-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RNF149-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RNF149-Exone abzielen, die für die RNF149-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RNF149-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RNF149 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RNF149 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RNF149-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RNF149 HDR-Plasmid (h) und RNF149 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RNF149-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RNF149-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.