Plásmido Doble Nickase (m) RNF148: sc-427917-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)RNF148 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa RNF148 (m) y el plásmido de doble nickasa RNF148 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Rnf148. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) RNF148 | sc-427917-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen Rnf148 de ratón codifica RNF148, una ligasa E3 de ubiquitina que contiene un dominio tipo RING finger, implicada en el recambio de proteínas dependiente de ubiquitina y en la regulación de la homeostasis proteica celular. Como parte del sistema ubiquitina–proteasoma, se espera que RNF148 influya en la estabilidad de componentes de vías que controlan la dinámica de señalización, las respuestas al estrés y procesos asociados al ciclo celular. La desregulación de la actividad de las ligasas E3 puede alterar la proteostasis y los programas transcripcionales downstream, proporcionando un vínculo mecanístico con fenotipos relevantes para la biología del desarrollo y el modelado de enfermedades en sistemas mamíferos. El estudio de RNF148 facilita la investigación de la regulación impulsada por la ubiquitinación y la identificación de sustratos que moldean las transiciones de estado celular.
RNF148 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Rnf148 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Rnf148. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Rnf148. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Rnf148 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.