Plasmide CRISPR/Cas9 KO RNase T2a (m): sc-437175
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- RNase T2a Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique RNase T2a, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: RNase T2 Antibody (E-5): sc-393729
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO RNase T2a (m) | sc-437175 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Rnaset2a code la ribonucléase lysosomale/sécrétée RNase T2a, membre de la famille conservée des RNases T2 impliquée dans le renouvellement de l’ARN et le recyclage des nucléotides. RNase T2a contribue à l’homéostasie cellulaire en favorisant la dégradation de l’ARN extracellulaire et endolysosomal, reliant ainsi le catabolisme de l’ARN à la fonction lysosomale et, plus largement, aux voies de signalisation de réponse au stress et de l’inflammation. Dans des modèles murins, la perturbation de l’activité de la famille RNase T2 est utilisée pour étudier comment la persistance anormale d’ARN influence la détection par l’immunité innée, la neuroinflammation et le remodelage tissulaire. Ces processus sont pertinents pour des investigations mécanistiques de phénotypes de type maladies de surcharge lysosomale et d’inflammation stérile associées à une mauvaise gestion des acides nucléiques.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RNase T2a (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rnaset2a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rnaset2a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rnaset2a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RNase T2a.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rnaset2a pour l'étude de la signalisation de RNase T2a, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Rnaset2a essentiels à la fonction de RNase T2a
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rnaset2a pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le RNase T2a plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RNase T2a plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rnaset2a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le RNase T2a plasmide HDR (m) et le RNase T2a (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rnaset2a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rnaset2a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.