Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RNase H1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422686
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- RNase H1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico RNase H1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:RNase H1 Anticorpo (H-4): sc-376326
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
RNase H1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422686 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O gene Rnaseh1 de camundongo codifica a RNase H1, uma endonuclease específica de estrutura que degrada a fita de RNA de híbridos RNA:DNA e resolve R-loops gerados durante a replicação e a transcrição. Ao processar intermediários dos fragmentos de Okazaki e limitar a formação persistente de R-loops, a RNase H1 contribui para a estabilidade dos genomas mitocondrial e nuclear, a progressão da forquilha de replicação e a homeostase transcricional. A desregulação do metabolismo de híbridos RNA:DNA está associada a estresse replicativo, sinalização de dano ao DNA e disfunção mitocondrial, tornando o Rnaseh1 um ponto útil para estudar vias de manutenção do genoma. Assim, a perturbação de Rnaseh1 é relevante para estudos mecanísticos em metabolismo de ácidos nucleicos, biologia mitocondrial e fenótipos de resposta ao estresse em células de mamíferos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RNase H1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Rnaseh1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Rnaseh1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Rnaseh1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RNase H1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Rnaseh1 para a investigação da sinalização de RNase H1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Rnaseh1 críticos para a função RNase H1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Rnaseh1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo RNase H1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo RNase H1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Rnaseh1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo RNase H1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR RNase H1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Rnaseh1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Rnaseh1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.