Plasmide CRISPR/Cas9 KO RNase H1 (m): sc-422686

Présentation

Rnaseh1 chez la souris code la RNase H1, une endonucléase spécifique de structure qui dégrade le brin d’ARN des hybrides ARN:ADN et résout les R-loops générés lors de la réplication et de la transcription. En traitant les intermédiaires des fragments d’Okazaki et en limitant la formation persistante de R-loops, la RNase H1 soutient la stabilité des génomes mitochondrial et nucléaire, la progression des fourches de réplication et l’homéostasie transcriptionnelle. Une dérégulation du métabolisme des hybrides ARN:ADN est associée au stress réplicatif, à l’activation de la signalisation des dommages à l’ADN et au dysfonctionnement mitochondrial, faisant de Rnaseh1 un point d’entrée utile pour étudier les voies de maintenance du génome. La perturbation de Rnaseh1 est donc pertinente pour des travaux mécanistiques sur le métabolisme des acides nucléiques, la biologie mitochondriale et les phénotypes de réponse au stress dans les cellules de mammifères.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RNase H1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rnaseh1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rnaseh1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rnaseh1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RNase H1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rnaseh1 pour l'étude de la signalisation de RNase H1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rnaseh1 essentiels à la fonction de RNase H1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rnaseh1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RNase H1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RNase H1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rnaseh1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RNase H1 plasmide HDR (m) et le RNase H1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rnaseh1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rnaseh1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.