Plasmide CRISPR/Cas9 KO RMND5A (h): sc-413041

Présentation

RMND5A (Required for Meiotic Nuclear Division 5 Homolog A) code une protéine conservée impliquée dans le contrôle de la qualité des protéines dépendant de l’ubiquitine, avec des rôles rapportés dans des processus associés aux ligases E3 d’ubiquitine qui influencent la protéostasie et la progression du cycle cellulaire. Via ses liens avec l’ubiquitination et le renouvellement de protéines régulatrices, RMND5A est étudié dans le contexte des réponses au stress, du contrôle de la prolifération et du maintien de l’homéostasie cellulaire. La perturbation des composants de la voie de l’ubiquitine est fréquemment associée à l’instabilité génomique et à une altération des signaux de croissance, ce qui fait de RMND5A une cible utile pour des études mécanistiques sur la dérégulation de la protéostasie dans la biologie des maladies humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RMND5A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RMND5A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RMND5A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RMND5A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RMND5A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RMND5A pour l'étude de la signalisation de RMND5A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RMND5A essentiels à la fonction de RMND5A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RMND5A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RMND5A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RMND5A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RMND5A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RMND5A plasmide HDR (h) et le RMND5A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RMND5A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RMND5A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.