Plasmide CRISPR/Cas9 KO RMI2 (h): sc-407104

Présentation

RMI2 (RecQ mediated genome instability 2) code un composant conservé du dissolvasome BLM–TOP3A–RMI1/2, qui favorise la dissolution des doubles jonctions de Holliday afin de supprimer les échanges entre chromatides sœurs et de maintenir la stabilité du génome. En coordonnant le traitement des intermédiaires de recombinaison homologue, RMI2 soutient une reprise fidèle des fourches de réplication et limite les événements de crossing-over aberrants lors de la réparation de l’ADN. Cette activité relie RMI2 aux voies centrales de la réponse aux dommages de l’ADN et au contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire en situation de stress réplicatif. Une altération de la fonction du dissolvasome, y compris une activité modifiée de RMI2, est associée à une augmentation de l’instabilité chromosomique et à des phénotypes observés dans des défauts de maintenance du génome liés au syndrome de Bloom, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes contribuant aux processus mutationnels associés au cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RMI2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RMI2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RMI2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RMI2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RMI2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RMI2 pour l'étude de la signalisation de RMI2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RMI2 essentiels à la fonction de RMI2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RMI2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RMI2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RMI2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RMI2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RMI2 plasmide HDR (h) et le RMI2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RMI2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RMI2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.