Plasmide CRISPR/Cas9 KO RLF (h): sc-406295

Présentation

RGL2 (Ral guanine nucleotide dissociation stimulator-like 2) code un facteur d’échange de nucléotides guanyliques (GEF) de la famille Ras qui contribue à l’activation des petites GTPases RalA/RalB en aval de la signalisation Ras. En modulant le cycle d’activation/inactivation des GTPases Ral, RGL2 influence les sorties de signalisation associées aux voies MAPK et PI3K, qui régissent le remodelage du cytosquelette, le trafic vésiculaire, la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress. Une activité altérée de la signalisation Ras–Ral a été impliquée dans la transformation oncogénique et l’invasion tumorale dans de multiples contextes tissulaires, ce qui fait de RGL2 un nœud utile pour des études mécanistiques de l’architecture des voies de signalisation. Dans des modèles cellulaires humains, la perturbation de RGL2 permet d’étudier comment la sélection des effecteurs de Ras façonne les phénotypes prolifératifs et migratoires et s’articule avec la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RLF (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RGL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RGL2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RGL2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RLF.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RGL2 pour l'étude de la signalisation de RLF, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RGL2 essentiels à la fonction de RLF
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RGL2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RLF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RLF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RGL2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RLF plasmide HDR (h) et le RLF (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RGL2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RGL2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.