Particules Lentivirales d'Activation (h) RKIP: sc-401270-LAC

Le gène humain PEBP1 code la protéine inhibitrice de la kinase Raf (RKIP), un modulateur conservé de la transduction du signal intracellulaire qui freine la signalisation MAPK/ERK en perturbant les interactions RAF–MEK, et influence également les voies des RCPG via la régulation de GRK2. RKIP contribue à l’équilibre entre prolifération, différenciation, apoptose et réponses au stress, et peut moduler le dialogue entre voies de signalisation impliquant NF-κB et d’autres programmes transcriptionnels. Des altérations de l’expression de RKIP ont été associées à des changements de la motilité cellulaire, à des phénotypes liés à l’invasion et à des états de signalisation inflammatoire dans divers modèles de maladie. En tant que régulateur nodal de la signalisation, PEBP1 est fréquemment étudié dans des travaux portant sur le remodelage des réseaux de kinases, le contrôle par rétroaction et des sorties transcriptionnelles dépendantes du contexte.

Les particules d'activation lentivirales RKIP (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PEBP1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales RKIP (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PEBP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de RKIP. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PEBP1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.