Plasmide CRISPR d'Activation (h) RISC: sc-406937-ACT

SCPEP1 humain (serine carboxypeptidase 1) code une protéine de type carboxypeptidase à sérine, sécrétée/extracellulaire, impliquée dans le traitement protéolytique et le remodelage du microenvironnement péricellulaire. SCPEP1 a été associée à des programmes cellulaires relevant de la biologie vasculaire, notamment la modulation du phénotype des cellules musculaires lisses, la migration et les réponses à des signaux inflammatoires, en interaction avec le renouvellement de la matrice extracellulaire et la signalisation des facteurs de croissance. Des altérations de l’expression de SCPEP1 ont été rapportées dans des contextes de remodelage vasculaire et de processus liés aux maladies cardiométaboliques, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans l’étude des voies associées à l’athérosclérose. En tant que composante des réseaux de protéases sécrétées, SCPEP1 présente également un intérêt pour analyser comment la protéolyse extracellulaire influence la communication intercellulaire et l’homéostasie tissulaire.

RISC Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SCPEP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RISC Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SCPEP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SCPEP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RISC. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SCPEP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RISC au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RISC dans les cellules tumorales présentant une expression de SCPEP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.