Plasmide CRISPR d'Activation (h) RIP4: sc-404910-ACT

Le gène humain **RIPK4** code la **kinase sérine/thréonine récepteur‑interagissante 4** (RIP4), une kinase de signalisation qui agit en aval de la **protéine kinase C** pour réguler la différenciation des kératinocytes, la morphogenèse épidermique et la formation de la barrière épithéliale. RIP4 participe à des voies contrôlant la signalisation **NF‑κB** et **MAPK**, et s’interface avec des programmes du cytosquelette et d’adhérence qui façonnent l’architecture épithéliale. Une activité dérégulée de RIPK4 a été associée à des altérations de l’homéostasie épithéliale, à une signalisation liée à l’inflammation et à la biologie tumorale dans les épithéliums squameux, ce qui la rend pertinente pour l’étude des états de différenciation et des réponses au stress épithélial. La connectivité de ses voies permet également d’interroger de manière mécanistique les programmes transcriptionnels qui gouvernent le développement de l’épithélium stratifié et le remodelage associé aux maladies.

RIP4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RIPK4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RIP4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RIPK4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RIPK4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RIP4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RIPK4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RIP4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RIP4 dans les cellules tumorales présentant une expression de RIPK4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.