Plasmide Double Nickase (h) RIP/Rab: sc-405836-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RIP/Rab correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RIP/Rab Double Nickase (h) et le plasmide RIP/Rab Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AGFG1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: RIP/Rab Antibody (H-2): sc-166651
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RIP/Rab | sc-405836-NIC | 20 µg | $410.00 |
AGFG1 (RIP/Rab) code une protéine contenant un domaine ArfGAP et des répétitions FG, impliquée dans l’endocytose médiée par la clathrine et le trafic membranaire, reliant la signalisation des petites GTPases à l’internalisation des cargos et au tri endosomal. Par ses interactions avec des composants de la machinerie endocytaire, RIP/Rab contribue au bourgeonnement des vésicules, au recyclage des récepteurs et à l’organisation spatiale de complexes de signalisation à la membrane plasmique. Le trafic dépendant d’AGFG1 peut influencer les voies en aval en régulant l’abondance et la localisation des récepteurs et transporteurs de surface. La dérégulation du contrôle endocytaire et du trafic médié par Rab/Arf a été associée à une altération de la signalisation cellulaire et de l’homéostasie, faisant d’AGFG1 une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles pertinents pour les maladies.
RIP/Rab Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AGFG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AGFG1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AGFG1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AGFG1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.