RINT-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407428

Übersicht

RINT1 kodiert RINT-1, ein Coiled-Coil-Protein, das zur Homöostase von Golgi-Apparat und endoplasmatischem Retikulum (ER) beiträgt, indem es das Andocken von Vesikeln sowie den Membrantransport zwischen diesen Kompartimenten unterstützt. RINT-1 ist daran beteiligt, die korrekte Organisation des sekretorischen Weges aufrechtzuerhalten und zelluläre Antworten auf proteotoxischen sowie replikationsassoziierten Stress zu koordinieren – Prozesse, die mit Genomstabilität und Zellzykluskontrolle verknüpft sind. Eine Störung des RINT1-abhängigen Transports kann die Proteinverarbeitung und die Integrität von Organellen beeinträchtigen und dadurch Signalwege sowie die Stressanpassung verändern. Genetische und funktionelle Studien haben RINT1 mit einer erhöhten Krebsanfälligkeit und anderen proliferativen Erkrankungen in Verbindung gebracht, was es für die Untersuchung von Mechanismen relevant macht, die intrazellulären Transport mit onkogenen Stressantworten koppeln.

Das RINT-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RINT1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RINT1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RINT1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RINT-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RINT1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RINT-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RINT1-Exone abzielen, die für die RINT-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RINT1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RINT-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RINT-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RINT1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RINT-1 HDR-Plasmid (h) und RINT-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RINT1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RINT1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.