Plasmide Double Nickase (h) Ring1b: sc-404633-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Ring1b correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Ring1b Double Nickase (h) et le plasmide Ring1b Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RNF2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: RING1B Antibody (N-32): sc-101109
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Ring1b | sc-404633-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Ring1b | sc-404633-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF2 code pour Ring1b, une ligase E3 ubiquitine de type RING finger qui constitue le cœur catalytique du complexe répressif Polycomb 1 (PRC1). Ring1b monoubiquitinyle l’histone H2A sur la lysine 119, renforçant la compaction de la chromatine médiée par Polycomb et la répression transcriptionnelle au cours du développement et de la spécification des lignages. En coordination avec la méthylation de H3K27 dépendante de PRC2 et d’autres régulateurs épigénétiques, RNF2 contribue au contrôle des programmes du cycle cellulaire, des états de différenciation et des réponses aux dommages de l’ADN. Une activité dérégulée de RNF2 et la signalisation de PRC1 sont impliquées dans des réseaux transcriptionnels altérés observés dans de nombreux types de cancers et d’autres troubles liés à une mauvaise régulation épigénétique.
Ring1b Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RNF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RNF2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RNF2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RNF2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.