Plasmide Double Nickase (m) RIG-I: sc-432915-NIC

La Ddx58 murine code RIG-I, une hélicase ARN cytosolique de la famille DExD/H-box qui agit comme récepteur de reconnaissance des motifs (PRR) pour des ARN viraux portant une extrémité 5′ triphosphate et de courts ARN double brin. La liaison du ligand déclenche une activation conformationnelle et une signalisation via MAVS, activant les voies TBK1/IKKε et IRF3/IRF7 ainsi que la voie NF-κB, afin d’induire des programmes d’expression de l’interféron de type I et de gènes inflammatoires. L’activité de RIG-I façonne l’immunité innée en interagissant avec la présentation de l’antigène, les réseaux de cytokines et les mécanismes intrinsèques de restriction antivirale. Une dérégulation de la signalisation Ddx58/RIG-I est impliquée dans des réponses interféron inappropriées et des phénotypes associés à l’inflammation, ce qui en fait un modèle pertinent pour des études mécanistiques de l’homéostasie immunitaire et de la biologie des infections dans des systèmes murins.

RIG-I Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ddx58 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ddx58. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ddx58. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ddx58.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.