Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) RIG-I: sc-400812-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RIG-I correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RIG-I Double Nickase (h) et le plasmide RIG-I Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DDX58. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: RIG-I Antibody (D-12): sc-376845
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RIG-I | sc-400812-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) RIG-I | sc-400812-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DDX58 code RIG-I, une hélicase à ARN de type DExD/H-box localisée dans le cytosol, qui détecte des caractéristiques de l’ARN viral telles que des extrémités 5′ triphosphate et de courts ARN double brin, déclenchant la signalisation de l’immunité innée. Après liaison au ligand, RIG-I recrute MAVS au niveau des mitochondries pour activer TBK1/IKKε ainsi que les complexes IKK, ce qui induit une transcription dépendante d’IRF3/IRF7 et de NF-κB des interférons de type I et de cytokines pro-inflammatoires. Cette voie module la restriction antivirale, les programmes de cytokines et le dialogue avec l’apoptose et l’autophagie, et une signalisation RIG-I dérégulée a été impliquée dans des états inflammatoires pilotés par l’interféron, l’auto-immunité et des phénotypes du microenvironnement immunitaire tumoral. RIG-I est également étudiée dans la reconnaissance des agents pathogènes, les réponses au stress liées au métabolisme de l’ARN et les mécanismes d’échappement immunitaire des virus.
RIG-I Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DDX58 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DDX58. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DDX58. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DDX58.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.