Plasmide Double Nickase (h) Rictor: sc-400710-NIC

RICTOR code rictor, un composant d’échafaudage essentiel du complexe mTOR 2 (mTORC2), qui coordonne la signalisation des facteurs de croissance avec le métabolisme cellulaire, la survie et l’organisation du cytosquelette. Via la phosphorylation dépendante de mTORC2 de kinases AGC telles qu’AKT (Ser473), SGK1 et des isoformes de PKC, rictor régule la sortie de signalisation de l’axe insuline/PI3K, des programmes de transport ionique et la dynamique de l’actine influençant la migration et la polarité cellulaire. Une activité RICTOR/mTORC2 dérégulée est fréquemment étudiée dans des contextes de signalisation oncogénique, de dysfonctionnement métabolique et de remodelage adaptatif au stress, où un réglage altéré de la voie AKT peut remodeler les phénotypes de prolifération et de résistance. En conséquence, RICTOR est largement utilisé comme point d’entrée génétique pour disséquer la topologie du réseau mTOR et les interactions entre voies dans des modèles cellulaires humains.

Rictor Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RICTOR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RICTOR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RICTOR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RICTOR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.