Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ribosomal Protein S3: sc-402327-ACT

RPS3 code la protéine ribosomique S3, un composant conservé de la petite sous-unité ribosomique 40S, nécessaire à une initiation et une élongation fidèles de la traduction, soutenant ainsi la synthèse protéique globale et le contrôle de la croissance cellulaire. Au-delà de son rôle ribosomal, RPS3 a été impliquée dans la régulation des réponses au stress et de la stabilité du génome, notamment via des interactions avec des voies liées aux dommages oxydatifs et à la réparation de l’ADN. Des altérations de la biogenèse des ribosomes et du contrôle traductionnel peuvent contribuer à la transformation oncogénique et à des changements de destinée cellulaire, ce qui fait de RPS3 un nœud utile pour étudier la protéostasie, les programmes de prolifération et la signalisation d’adaptation au stress. La dérégulation des protéines ribosomiques et de la surveillance associée aux ribosomes a été associée à des ribosomopathies et à des phénotypes liés au cancer, ce qui étaye des recherches mécanistiques sur la manière dont la perturbation de RPS3 remodèle la production du protéome à partir du transcriptome.

Ribosomal Protein S3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RPS3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ribosomal Protein S3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RPS3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RPS3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ribosomal Protein S3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RPS3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ribosomal Protein S3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ribosomal Protein S3 dans les cellules tumorales présentant une expression de RPS3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.