Ribosomal Protein S18 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406494

Übersicht

RPS18 kodiert das ribosomale Protein S18, einen essenziellen Bestandteil der kleinen ribosomalen 40S-Untereinheit, der zur Stabilisierung der rRNA-Struktur beiträgt und eine präzise Decodierung während der Initiation und Elongation der Translation unterstützt. Als Teil der Ribosomenbiogenese und der globalen Proteinsynthese trägt RPS18 zur Proteostase, zum Zellwachstum und zu stressadaptiven Regulationswegen der Translation bei. Eine veränderte Expression oder Störung ribosomaler Proteine kann die Signalübertragung des nukleolären Stresses und p53-abhängige Checkpoints beeinflussen und so eine Verbindung zwischen Ribosomenfehlfunktionen und Änderungen in Proliferations- und Apoptoseprogrammen herstellen. Eine fehlregulierte Ribosomenbiogenese und Translation sind wiederkehrende Merkmale von Krebs und Ribosomopathien, wodurch RPS18 ein nützlicher Ansatzpunkt ist, um zu untersuchen, wie die zentrale Translationsmaschinerie mit krankheitsassoziierten zellulären Zuständen verknüpft ist.

Das Ribosomal Protein S18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RPS18-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RPS18-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RPS18 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ribosomal Protein S18-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RPS18-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ribosomal Protein S18-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RPS18-Exone abzielen, die für die Ribosomal Protein S18-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RPS18-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ribosomal Protein S18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Ribosomal Protein S18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RPS18-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ribosomal Protein S18 HDR-Plasmid (h) und Ribosomal Protein S18 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RPS18-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RPS18-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.