Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ribosomal Protein S15: sc-410994-ACT

RPS15 code la protéine ribosomique S15, un composant conservé de la petite sous-unité ribosomique 40S qui soutient la biogenèse des ribosomes et l’initiation de la traduction en contribuant au traitement du pré-ARNr et au décodage de l’ARNm. En tant qu’élément de la machinerie traductionnelle de base, RPS15 est lié à des voies qui régulent la synthèse des protéines, la croissance cellulaire et l’adaptation de la traduction en réponse au stress. Des perturbations du dosage des protéines ribosomiques peuvent influencer la fonction nucléolaire et la protéostase, des processus souvent étudiés dans le cadre du contrôle de la prolifération et des réponses cellulaires au stress. Une biogenèse ribosomique et une production traductionnelle altérées sont également pertinentes pour les ribosomopathies et pour la recherche sur les programmes de croissance dérégulés observés dans des contextes associés au cancer.

Ribosomal Protein S15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RPS15 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ribosomal Protein S15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RPS15 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RPS15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ribosomal Protein S15. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RPS15 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ribosomal Protein S15 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ribosomal Protein S15 dans les cellules tumorales présentant une expression de RPS15 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.