Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ribosomal Protein S14: sc-403429-ACT

RPS14 code la protéine ribosomique S14, un composant essentiel de la petite sous-unité ribosomique 40S, qui contribue au décodage fidèle de l’ARNm et à l’initiation de la synthèse protéique. Par son rôle dans la biogenèse des ribosomes et le contrôle de la traduction, RPS14 participe à la protéostasie et à la progression du cycle cellulaire, ce qui l’associe à des programmes de réponse au stress tels que la surveillance nucléolaire et les points de contrôle liés à p53. Une altération de la fonction des protéines ribosomiques peut perturber la traduction globale et affecter de manière sélective des transcrits impliqués dans la croissance et la différenciation, faisant de RPS14 un point d’entrée utile pour étudier les ribosomopathies et les phénotypes prolifératifs. Dans des systèmes expérimentaux, la dérégulation de facteurs d’assemblage des ribosomes, dont RPS14, a été associée à des anomalies hématopoïétiques et à un remodelage traductionnel lié au cancer.

Ribosomal Protein S14 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RPS14 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ribosomal Protein S14 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RPS14 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RPS14, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ribosomal Protein S14. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RPS14 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ribosomal Protein S14 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ribosomal Protein S14 dans les cellules tumorales présentant une expression de RPS14 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.