Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ribosomal Protein S13 (h): sc-406367

Présentation

RPS13 code la protéine ribosomique S13, un composant essentiel de la petite sous-unité ribosomique 40S, qui soutient l’assemblage du ribosome, le processing de l’ARNr et un décodage fidèle de l’ARNm lors de la traduction. Par son rôle dans la synthèse protéique cytosolique, RPS13 contribue au contrôle de la croissance cellulaire et à la protéostasie, et s’insère dans des voies sensibles à la capacité de traduction, notamment les réponses adaptatives au stress et la surveillance nucléolaire. La perturbation de l’homéostasie des protéines ribosomiques est liée aux ribosomopathies et a été associée à des programmes de prolifération altérés observés dans plusieurs contextes cancéreux, faisant de RPS13 un nœud utile pour étudier comment la production traductionnelle façonne l’état cellulaire. En tant que facteur ribosomique conservé, RPS13 est également pertinent pour étudier la dynamique globale de la traduction, la traduction sélective de certains ARNm et les conséquences d’un déséquilibre de la biogenèse des ribosomes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ribosomal Protein S13 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RPS13 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RPS13, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RPS13 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ribosomal Protein S13.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RPS13 pour l'étude de la signalisation de Ribosomal Protein S13, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RPS13 essentiels à la fonction de Ribosomal Protein S13
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RPS13 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ribosomal Protein S13 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Ribosomal Protein S13 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RPS13. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ribosomal Protein S13 plasmide HDR (h) et le Ribosomal Protein S13 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RPS13 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RPS13 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.