Plásmido CRISPR de Activación (h) Ribosomal Protein L5: sc-403453-ACT

RPL5 codifica la proteína ribosomal L5, un componente central de la subunidad grande 60S del ribosoma que se une al ARNr 5S y lo escolta durante la biogénesis ribosomal, además de favorecer una traducción precisa. Más allá de su papel estructural en los ribosomas citosólicos, RPL5 contribuye a la homeostasis nucleolar y conecta el estrés ribosomal con la regulación de la vía de p53 mediante interacciones con MDM2, influyendo en el control del ciclo celular y la apoptosis. La alteración de RPL5 puede afectar el procesamiento del ARNr y la síntesis global de proteínas, repercutiendo en programas de proliferación y diferenciación. Los cambios en la función o la dosis de RPL5 se han asociado con ribosomopatías y con la desregulación de la traducción relacionada con el cáncer, por lo que es relevante para estudios de proteostasis y señalización del estrés.

Ribosomal Protein L5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RPL5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ribosomal Protein L5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RPL5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RPL5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ribosomal Protein L5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RPL5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ribosomal Protein L5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ribosomal Protein L5 en células tumorales con expresión de RPL5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.