Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ribosomal Protein L30 (h): sc-406356

Présentation

RPL30 code la protéine ribosomique L30, un composant essentiel de la grande sous-unité ribosomique 60S, qui contribue à l’assemblage des ribosomes et à l’élongation de la traduction. En tant qu’élément du réseau de biogenèse des ribosomes et de synthèse protéique, RPL30 soutient la protéostasie et la signalisation liée à la croissance en permettant une traduction efficace des ARNm. La perturbation des protéines ribosomiques peut déclencher des réponses de stress nucléolaire et modifier les points de contrôle dépendants de p53, reliant ainsi la fonction ribosomique au contrôle du cycle cellulaire et à l’apoptose. Une biogenèse ribosomique et un contrôle de la traduction dérégulés constituent des caractéristiques récurrentes dans divers états prolifératifs et d’adaptation au stress, ce qui fait de RPL30 une cible pertinente pour étudier les mécanismes qui couplent la capacité de traduction à la fitness cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ribosomal Protein L30 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RPL30 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RPL30, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RPL30 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ribosomal Protein L30.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RPL30 pour l'étude de la signalisation de Ribosomal Protein L30, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RPL30 essentiels à la fonction de Ribosomal Protein L30
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RPL30 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ribosomal Protein L30 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Ribosomal Protein L30 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RPL30. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ribosomal Protein L30 plasmide HDR (h) et le Ribosomal Protein L30 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RPL30 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RPL30 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.