Plásmido CRISPR de Activación (h) Ribosomal Protein L28: sc-405270-ACT

RPL28 codifica la proteína ribosomal L28, un componente central de la subunidad ribosomal grande 60S, necesaria para una elongación de la traducción precisa y una biogénesis ribosomal eficiente. Como parte de la vía de ensamblaje ribosomal nucleolar, RPL28 contribuye al procesamiento del ARNr, la maduración de la subunidad grande y la proteostasis, vinculando su actividad al control del crecimiento celular y a la reprogramación traduccional adaptativa frente al estrés. La expresión o la dosis alteradas de proteínas ribosomales pueden perturbar la traducción global y selectiva de ARNm y activar la señalización de estrés nucleolar, procesos que se investigan con frecuencia en biología del cáncer y en otros trastornos que implican una síntesis proteica desregulada. Por ello, RPL28 es un punto de entrada útil para estudiar la función del ribosoma, las redes de control traduccional y los efectos posteriores sobre la progresión del ciclo celular y la adaptación metabólica.

Ribosomal Protein L28 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RPL28 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ribosomal Protein L28 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RPL28 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RPL28, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ribosomal Protein L28. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RPL28 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ribosomal Protein L28 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ribosomal Protein L28 en células tumorales con expresión de RPL28 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.